Le avventure di Johnny Test, un normale ragazzo di periferia, che si presta a fare da cavia per i vari esperimenti delle sue geniali sorelle gemelle, combattendo a malincuore i cattivi.
La serie ruota attorno alle avventure del protagonista, Johnny Test, un ragazzino di periferia di 11 anni che vive con i suoi genitori, le sue "super geniali" sorelle gemelle di 13 anni, Susan e Mary, che sono scienziate e migliori amiche tra loro, e un cane parlante di nome Dukey. Risiedono nella città immaginaria di Porkbelly (negli Stati Uniti o in Canada). Johnny viene spesso utilizzato come cavia per le invenzioni e gli esperimenti delle sue geniali sorelle gemelle, che vanno dai gadget ai superpoteri. I loro esperimenti causano spesso problemi che lui deve risolvere e a volte deve combattere i cattivi. A volte salva il mondo con le invenzioni delle sue sorelle.
Nel 2013, Teletoon aveva originariamente annunciato il rinnovo di una settima stagione di 13 episodi e di uno speciale in tre parti, che però non è stato prodotto dopo la cancellazione dello show. Tuttavia, il 6 maggio 2020, WildBrain ha confermato che una serie revival è stata scelta da Netflix per due stagioni e uno speciale interattivo di 66 minuti, che uscirà nel 2021 con il ritorno di Fellows come showrunner e produttore esecutivo.
L'undicenne Johnny fa parte della famiglia Test, composta dalle sue gemelle geniali di 13 anni, Susan e Mary, e dai suoi genitori stravaganti. Sua madre "Lila" è una donna d'affari e suo padre "Hugh" è un marito casalingo ossessivo-compulsivo. Le due principali ossessioni di Hugh sono la pulizia e la cottura del polpettone. I gemelli Test usano spesso Johnny come cavia per i loro vari esperimenti e invenzioni nel loro laboratorio pieno di tecnologia altamente avanzata costruito nella soffitta di casa dei Test. La maggior parte di questi esperimenti consiste nel cercare di impressionare il loro bel vicino di casa, Gil, per il quale entrambi nutrono un profondo amore e un'ossessione, anche se i loro tentativi di trovare un modo per attirare la sua attenzione di solito falliscono.
Johnny è un ragazzo dispettoso e imprevedibile che causa molti problemi (che spesso raggiungono la città). Il suo migliore amico è il suo cane antropomorfo parlante, Dukey, a cui Susan e Mary hanno dato un'intelligenza di livello umano e la capacità di parlare durante un esperimento. Dato che Johnny ha Susan, Mary e Dukey al suo fianco, può vivere i sogni di qualsiasi bambino, solo per scoprire che la maggior parte dei sogni non si realizzano mai come sperato. Johnny è molto iperattivo e spesso combina guai e disordini con le invenzioni delle sorelle, ma altrettanto spesso si dimostra intelligente, come ad esempio ingannando spesso le sorelle o salvando la situazione da qualsiasi pericolo si presenti. È anche testardo e, come molti bambini, non ama la scuola; anzi, spesso fa di tutto per evitare di lavorare, spesso utilizzando le invenzioni delle sue sorelle per farlo, mettendo se stesso e gli altri nei guai.
Una delle principali nemesi di Johnny è Eugene "Bling-Bling Boy" Hamilton, un acerrimo rivale delle sorelle Test e amico di Johnny e Dukey, che però ha anche una cotta non corrisposta per Susan. Un'altra è Sissy Cutler, un maschiaccio che spesso è la rivale/amica di Johnny; i due potrebbero avere delle cotte l'uno per l'altra, ma entrambi spesso negano e competono l'uno contro l'altro. Missy, il labradoodle rosa di Sissy, è la rivale/cotta di Dukey. Un terzo è Bumper Randalls, il bullo della scuola che prende costantemente di mira Johnny. Nel frattempo, il Generale della base militare Area 51.1 e Mr. Black e Mr. White, due agenti federali della Super Secret Government Agency (SSGA), sono amici dei ragazzi e spesso li tirano fuori dai guai o li reclutano per un incarico, li aiutano, li distraggono o li infastidiscono in varie occasioni.